A malária é uma doença infecciosa causada por um parasito do gênero Plasmodium, que é transmitido para humanos pela picada das fêmeas infectadas dos mosquitos Anopheles. Uma das técnicas utilizadas para a detecção desse parasito é o PCR em tempo real (qPCR). As fases dessa técnica contemplam as seguintes etapas:
- A)desnaturação, anelamento, extensão e aplicação do produto da reação de PCR em tempo real no gel de agarose.
Errada, porque inclui a aplicação do produto em gel de agarose, etapa da PCR convencional, e a qPCR é acompanhada por fluorescência em tempo real.
- B)anelamento, extensão e aplicação do produto da reação de PCR em tempo real no gel de agarose.
Errada, porque também traz a análise em gel de agarose e ainda omite a desnaturação, que faz parte do ciclo básico da PCR.
- C)anelamento e extensão.
Errada, porque falta a etapa de desnaturação, que é indispensável para separar as fitas de DNA antes do anelamento.
- D)desnaturação, anelamento e extensão.
Certa, porque as fases da PCR em tempo real incluem desnaturação, anelamento e extensão.
- E)extensão e aplicação do produto da reação de PCR em tempo real no gel de agarose.
Errada, porque está incompleta ao omitir a desnaturação e ainda mistura a qPCR com a etapa de gel de agarose.
Gabarito: D
A PCR em tempo real (qPCR) segue o mesmo ciclo básico da PCR tradicional: primeiro ocorre a desnaturação, quando o DNA dupla fita se separa; depois vem o anelamento, em que os primers se ligam às sequências alvo; e, por fim, a extensão, quando a DNA polimerase sintetiza a nova fita. Esse ciclo se repete várias vezes, gerando amplificação exponencial do material genético. O diferencial da qPCR é que a amplificação é acompanhada em tempo real por sinal fluorescente, então você não precisa esperar o fim da reação para “ver” o resultado. O ponto central da questão é esse: as etapas da técnica são exatamente desnaturação, anelamento e extensão, o que torna correta a alternativa D. Já a leitura em gel de agarose é típica da PCR convencional, não da qPCR.