A massa molecular e a composição das subunidades de até mesmo pequenas quantidades de uma proteína podem ser determinadas pela eletroforese em gel de poliacrilamida-SDS. Na eletroforese em gel bidimensional, as proteínas são
- A)quantificadas pelos aminoácidos que possuem.
Errada, porque eletroforese não quantifica proteínas pelos aminoácidos que elas possuem, e sim separa moléculas por propriedades físico-químicas.
- B)separadas por peso molecular em uma dimensão.
Errada, porque a separação por peso molecular em uma dimensão descreve o SDS-PAGE, não a eletroforese bidimensional.
- C)separadas em gel de poliacrilamida em uma única dimensão.
Errada, porque isso também descreve apenas uma eletroforese em gel de poliacrilamida em uma dimensão, sem a etapa adicional da técnica bidimensional.
- D)separadas como pontos separados pela focalização isoelétrica em uma única dimensão.
Errada, porque a focalização isoelétrica sozinha é só a primeira dimensão da técnica bidimensional, não o processo completo.
- E)resolvidas como pontos separados pela focalização isoelétrica em uma dimensão, seguida de uma eletroforese em gel de poliacrilamida em segunda dimensão.
Certa, porque a eletroforese bidimensional combina focalização isoelétrica na primeira dimensão e SDS-PAGE na segunda, resultando em pontos separados no gel.
Gabarito: E
A eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS é um clássico da bioquímica: o SDS “desnatura” a proteína e padroniza a carga negativa, fazendo com que a separação dependa principalmente do tamanho molecular. Assim, ela é ótima para estimar massa molecular e, em muitos casos, inferir a composição das subunidades quando a proteína é dissociada. Já a eletroforese bidimensional vai um passo além e mistura dois critérios de separação diferentes, como se a proteína tivesse de passar por duas “peneiras” em sequência. Na primeira dimensão, as proteínas são separadas por ponto isoelétrico, na focalização isoelétrica. Em termos simples, cada proteína migra até o pH em que sua carga líquida fica zero e “para” ali. Depois disso, vem a segunda dimensão, feita em gel de poliacrilamida com SDS, que separa as proteínas conforme o peso molecular. É por isso que o resultado final aparece como pontos no gel: cada ponto representa uma proteína com comportamento específico nos dois critérios. Então, o gabarito E está correto porque descreve exatamente a lógica da eletroforese bidimensional: primeiro focalização isoelétrica em uma dimensão, depois SDS-PAGE na segunda dimensão. Esse método é muito usado em proteômica para comparar perfis proteicos e detectar diferenças finas entre amostras. Se você guardar a sequência, não erra: primeiro separa pela carga/pI, depois pelo tamanho. Na prova, a banca costuma trocar a ordem ou misturar o conceito de uma técnica com a outra para ver se você está atento.