O método de ELISA é muito utilizado no diagnóstico de doenças infecciosas, uma vez que, antígenos destes agentes podem ser identificados diretamente na amostra clínica. Em relação ao método de ELISA, analise as afirmativas a seguir e assinale (V) para a verdadeira e (F) para a falsa. ( ) O método de ELISA indireto possui vantagens e desvantagens em relação ao método direto. Uma das vantagens é a maior sensibilidade, uma vez que a técnica amplifica o sinal detectado. ( ) O método competitivo de ELISA para pesquisa de antígenos, consiste na adição de anticorpos marcados com enzimas em uma reação, onde competirão com os antígenos da amostra clínica por anticorpos imobilizados na fase sólida. ( ) O método de ELISA direto para captura de antígenos, consiste na utilização de anticorpos imobilizados em uma fase sólida que reagirão com antígenos presentes na amostra clínica. Os antígenos ligados aos anticorpos imobilizados são então detectados por anticorpos diretamente conjugados às enzimas de revelação. As afirmativas são, na ordem apresentada, respectivamente,
- A)F – V – F.
Errada, porque a primeira afirmativa é verdadeira e a segunda também é falsa, então a sequência não é F - V - F.
- B)F – V – V.
Errada, porque a primeira afirmativa é verdadeira, a segunda é falsa e a terceira é verdadeira.
- C)V – F – V.
Certa, pois a sequência correta das afirmativas é V - F - V.
- D)V – F – F.
Errada, porque a primeira afirmativa não é falsa e a terceira não é falsa.
- E)F – F – V.
Errada, porque a terceira afirmativa é verdadeira, então não pode terminar em F.
Gabarito: C
O ELISA, em suas várias versões, muda basicamente quem fica preso na placa, quem compete com quem e quem vem marcado com enzima. A lógica é simples: se a reação gera mais sinal para cada alvo detectado, você ganha sensibilidade; se há competição, um componente da amostra disputa espaço com um reagente conhecido, e isso pode inverter a leitura do teste. No ELISA indireto, a grande sacada é a amplificação do sinal. Em geral, um anticorpo primário se liga ao alvo e depois um anticorpo secundário marcado com enzima reconhece o primeiro. Como mais de um anticorpo secundário pode contribuir para a leitura, a sensibilidade costuma ser maior do que no ELISA direto. Por isso a primeira afirmativa é verdadeira. Já a segunda afirmativa mistura as peças do tabuleiro. No ELISA competitivo, quem compete normalmente é o antígeno da amostra com um antígeno marcado, ou então o analito com outro reagente equivalente, e não anticorpos marcados disputando diretamente com antígenos por anticorpos imobilizados da forma descrita. Essa troca de papéis derruba a assertiva. A terceira afirmativa descreve corretamente o esquema de captura de antígeno: anticorpos ficam imobilizados na fase sólida, capturam o antígeno da amostra e, depois, outro anticorpo ligado à enzima revela o complexo. Em prova, a FGV costuma cobrar exatamente essa atenção aos papéis de antígeno, anticorpo e enzima, então o gabarito fica V - F - V, isto é, alternativa C.