Em relação à reação de PCR, analise as afirmativas a seguir e assinale (V) para a verdadeira e (F) para a falsa. ( ) As etapas fundamentais de uma reação de PCR são a desnaturação térmica do DNA molde, o anelamento do oligonucleotídeo iniciador às fitas moldes e a extensão ou polimerização das novas fitas de DNA que utilizam os dNTPs como substrato da reação de polimerização. ( ) O magnésio é um cofator da enzima DNA polimerase, sendo sua concentração fundamental para a correta realização da reação de PCR. O ajuste incorreto da quantidade deste íon pode gerar artefatos na reação, uma vez que concentrações baixas de Mg podem impedir a desnaturação completa do molde de DNA, além de diminuir a especificidade da reação; já concentrações altas de Mg não permitem a realização da reação. ( ) A concentração de dNTPs (dATP, dCTP, dGDP e dTTP) deve ser calculada de modo que dCTP e dGDP tenham o dobro da concentração dos demais desoxirribonucleotídeos. As afirmativas são, na ordem apresentada, respectivamente,
- A)F – V – F.
Errada, porque a primeira afirmativa é verdadeira e a sequência não começa com F.
- B)F – V – V.
Errada, porque a primeira afirmativa é verdadeira e a terceira também é falsa, então a sequência não fecha.
- C)V – F – F.
Certa, pois a primeira afirmativa é verdadeira e as duas seguintes são falsas.
- D)V – V – F.
Errada, porque a segunda afirmativa sobre magnésio foi construída com erro conceitual e não pode ser considerada verdadeira.
- E)F – F – V.
Errada, porque a primeira afirmativa não é falsa e a terceira não é verdadeira.
Gabarito: C
A PCR (reação em cadeia da polimerase) é uma técnica de amplificação de DNA que depende de três etapas básicas: desnaturação, anelamento dos primers e extensão pela DNA polimerase. É o ciclo clássico da biologia molecular: separar, parear e copiar. A primeira afirmativa descreve exatamente esse processo, então está correta. A segunda afirmativa tenta lembrar que o magnésio é importante na reação, e isso é verdade: o Mg2+ é cofator da DNA polimerase e sua concentração influencia muito o rendimento e a especificidade da PCR. O problema é que a banca escorrega ao dizer que baixa concentração de Mg impede a desnaturação do molde e que alta concentração não permite a reação. Na prática, o Mg2+ não é quem faz a desnaturação do DNA, que ocorre pelo aquecimento; o desequilíbrio de magnésio pode reduzir a atividade enzimática, alterar a especificidade e favorecer artefatos, mas não por esse motivo descrito. Por isso, a afirmativa é falsa. A terceira afirmativa também está errada. A formulação correta da mistura de dNTPs não exige que dCTP e dGTP tenham o dobro da concentração dos demais. Em PCR, os quatro desoxirribonucleotídeos costumam ser preparados em concentrações semelhantes, porque o ideal é manter equilíbrio entre os substratos da síntese de DNA. Além disso, a própria enunciação cita dGDP e dTTP, o que já denuncia um erro conceitual, pois o correto seria dGTP, não dGDP. Assim, a sequência fica: V - F - F, que corresponde à alternativa C.