Um técnico pretende preparar uma única lâmina de imuno fluorescência para identificar e diferenciar linfócitos T e B, em corte congelado de linfonodo humano. Para tal, ele deve utilizar dois anticorpos primários, o primeiro feito em coelho anti-CD20 humano e o segundo feito em camundongo anti-CD3 humano. Assinale a opção que mostra o conjunto de anticorpos secundários que este técnico deve utilizar para realizar esta dupla marcação, com vistas à visualização em microscópio de epifluorescência.
- A)Um anticorpo secundário anti-coelho feito em cabra complexado a um fluoróforo verde e um anticorpo secundário anti-camundongo feito em galinha complexado a um fluoróforo vermelho.
Correta, porque usa um secundário anti-coelho para detectar o primário de coelho e um secundário anti-camundongo para detectar o primário de camundongo, cada um com fluoróforo diferente.
- B)Um anticorpo secundário anti-cabra feito em coelho complexado a um fluoróforo verde e um anticorpo secundário anti-galinha feito em camundongo complexado a um fluoróforo vermelho.
Errada, porque os secundários estão invertidos: o anticorpo anti-cabra não faz sentido para um primário de coelho, e o anti-galinha não corresponde a um primário de camundongo.
- C)Um anticorpo secundário anti-coelho feito em cabra e um anticorpo secundário anti-camundongo feito em galinha ambos complexados a um fluoróforo verde.
Errada, porque os dois secundários estão com o mesmo fluoróforo verde, o que impede distinguir as duas populações celulares na dupla marcação.
- D)Um anticorpo secundário anti-coelho feito em camundongo complexado a um fluoróforo verde e um anticorpo secundário anti-camundongo feito em coelho complexado a um fluoróforo vermelho.
Errada, porque os secundários foram feitos nas espécies erradas, trocando coelho e camundongo, o que compromete o reconhecimento dos primários.
- E)Um anticorpo secundário anti-coelho feito em cabra e um anticorpo secundário anti-camundongo feito em galinha ambos complexados a um fluoróforo vermelho.
Errada, porque embora as espécies dos secundários sejam compatíveis com os primários, ambos foram conjugados ao mesmo fluoróforo vermelho, inviabilizando a diferenciação das marcas.
Gabarito: A
Numa imunofluorescência indireta, os anticorpos primários reconhecem o alvo e os secundários servem para “enxergar” esse primário, carregando o fluoróforo. Aqui, o primário anti-CD20 foi produzido em coelho, então o secundário precisa ser anti-coelho. O primário anti-CD3 foi produzido em camundongo, então o secundário precisa ser anti-camundongo. Simples assim: o secundário sempre deve reconhecer a espécie em que o primário foi produzido, e os dois fluoróforos devem ser diferentes para permitir dupla marcação no microscópio de epifluorescência.