Os fixadores aldeídos promovem ligações cruzadas com as estruturas teciduais formando uma malha que impede a ligação entre antígenos e anticorpos. A etapa de recuperação antigênica promove o rompimento destas ligações e permite a correta realização da técnica de imuno-histoquímica. Assinale a opção que indica o protocolo que deve ser empregado, após a microtomia, para recuperação antigênica de tecidos que foram submetidos à fixação por formol e processados para parafina.
- A)As lâminas são mantidas em estufa para aderência dos cortes, e em seguida submetidas a banhos consecutivos de álcool 95% seguidos de ácido clorídrico 10%.
Errada, porque ácido clorídrico e banhos alcoólicos não correspondem ao protocolo de recuperação antigênica em tecido fixado em formol e incluído em parafina.
- B)As lâminas são imediatamente imersas em solução tampão citrato de sódio pH 6,0 e aquecidas a 37° C por 30 minutos; em seguida são desparafinizadas e hidratadas.
Errada, porque a lâmina deve ser desparafinizada e hidratada antes da recuperação antigênica, e não depois.
- C)As lâminas são mantidas em estufa, para aderência dos cortes e, em seguida, desparafinizadas e hidratadas; após a hidratação, as lâminas são colocadas em tampão citrato de sódio pH 6,0 e aquecidas em banho maria a 37°C, por 30 minutos.
Errada, porque a recuperação antigênica vem após a desparafinação e hidratação, além de 37°C ser insuficiente para o protocolo clássico descrito.
- D)As lâminas são mantidas em estufa para aderência dos cortes, e, em seguida, desparafinizadas e hidratadas, coradas por Hematoxilina e lavadas em água corrente; após a coloração, as lâminas são colocadas em tampão citrato de sódio pH 6,0 e aquecidas em banho maria a 95°C, por 5 minutos.
Errada, porque a coloração por hematoxilina não faz parte da etapa de recuperação antigênica e, além disso, a ordem do procedimento está incorreta.
- E)As lâminas são mantidas em estufa e em seguida desparafinizadas e hidratadas; após a hidratação, as lâminas são colocadas em tampão citrato de sódio pH 6,0 e aquecidas em banho maria a 95°C, por 30 minutos.
Certa, porque o tecido deve ser desparafinado, hidratado e então submetido à recuperação antigênica em tampão citrato pH 6,0 aquecido a 95°C por 30 minutos.
Gabarito: E
Na imuno-histoquímica, o tecido geralmente vem fixado em formol e incluído em parafina. O problema é que o formol cria ligações cruzadas entre proteínas, o que pode “mascarar” os antígenos e atrapalhar a ligação com os anticorpos. Por isso, depois da microtomia, o material precisa passar primeiro por desparafinização e hidratação, para sair da parafina e voltar a receber soluções aquosas normalmente. Depois dessa etapa, entra a recuperação antigênica. Ela costuma ser feita com tampão citrato de sódio em pH ácido, aquecido, para desfazer parte dessas ligações cruzadas e expor melhor os sítios antigênicos. No enunciado, a opção correta é a que descreve o uso de tampão citrato de sódio pH 6,0 aquecido em banho-maria a 95°C por 30 minutos, após desparafinar e hidratar o corte. Esse protocolo é o clássico de “heat-induced epitope retrieval” (HIER), muito cobrado em prova. A lógica é simples: primeiro você limpa o caminho, retirando parafina e reidratando; depois você aquece para desmascarar o antígeno. Se inverter a ordem, a técnica já começa tropeçando na própria lâmina. Em resumo: fixação em formol exige recuperação antigênica, e a sequência correta envolve desparafinação, hidratação e aquecimento em tampão apropriado. É exatamente por isso que a letra E está correta.