Nas técnicas de imuno-histoquímica alguns componentes teciduais podem influenciar a reação e promover ligações inespecíficas. Dentre estes componentes, a peroxidase tecidual endógena é particularmente importante em reações cujo substrato cromógeno é o tetracloreto de 3'3' - diaminobenzidina (DAB). Para evitar a reação inespecífica do DAB com essa enzima, durante a técnica de imuno-histoquímica, o técnico deve incluir uma etapa em que a lâmina será incubada em uma solução contendo
- A)leite desnatado.
Errada: leite desnatado é usado como bloqueador de ligações inespecíficas, não para inativar peroxidase endógena.
- B)albumina bovina.
Errada: albumina bovina também serve como bloqueio de ligações inespecíficas, mas não bloqueia a enzima tecidual.
- C)peróxido de hidrogênio.
Certa: o peróxido de hidrogênio bloqueia a peroxidase endógena e evita reação inespecífica com o DAB.
- D)soro de cabra.
Errada: soro de cabra é usado para reduzir ligação inespecífica de anticorpos secundários, não para neutralizar peroxidase.
- E)metabissulfito de potássio.
Errada: metabissulfito de potássio não é o agente clássico para bloquear peroxidase endógena na imuno-histoquímica com DAB.
Gabarito: C
Na imuno-histoquímica, a ideia é fazer o anticorpo “achar” o alvo no tecido sem que o cromógeno saia pintando qualquer coisa que apareça pela frente. O problema é que alguns tecidos têm enzimas próprias, como a peroxidase endógena, que podem reagir com o sistema de revelação e gerar marcação inespecífica. Isso fica especialmente importante quando o cromógeno usado é a DAB (diaminobenzidina), porque ela depende da ação de peroxidase para formar o produto marrom da reação. Se a peroxidase do próprio tecido ficar ativa, você pode ter falso-positivo e a lâmina vira quase uma obra de arte abstrata. Por isso, antes da etapa de revelação, o técnico faz o bloqueio da peroxidase endógena com uma solução de peróxido de hidrogênio. O H2O2 inativa essa enzima tecidual, reduzindo a coloração inespecífica e deixando a reação mais confiável. Então o gabarito é a letra C: peróxido de hidrogênio. É um passo clássico da técnica e aparece em protocolos de imuno-histoquímica como etapa de bloqueio enzimático antes do cromógeno DAB.