Em relação às técnicas de amplificação mediada por transcrição (TMA) e de amplificação baseada na sequência de ácido nucleico (NASBA), analise as afirmativas a seguir e assinale (V) para a verdadeira e (F) para a falsa. ( ) TMA se baseia em um ciclo contínuo isotérmico de amplificação, no qual a transcriptase reversa produz fitas de cDNA e, em seguida, a RNA polimerase; a partir deste, sintetiza novas fitas de RNA. ( ) Para diagnóstico de M. tuberculosis, TMA é mais sensível que PCR pelo fato de detectar sequências de rRNA que possuem um número maior de cópias por célula do que o DNA. ( ) NASBA, ao contrário de TMA, depende do uso de termocicladores uma vez que há temperaturas diferentes de desnaturação, anelamento e extensão. As afirmativas são, na ordem apresentada, respectivamente,
- A)F – V – F.
Errada, porque a primeira afirmativa é verdadeira, então não pode começar com F.
- B)F – V – V.
Errada, porque a primeira afirmativa é verdadeira e a terceira é falsa, invertendo a sequência esperada.
- C)V – F – F.
Errada, porque a primeira e a segunda afirmativas estão corretas, então não podem ser marcadas como V - F.
- D)V – V – F.
Correta, pois TMA é isotérmica com transcriptase reversa e RNA polimerase, a TMA pode ser mais sensível que PCR para M. tuberculosis por mirar rRNA, e a NASBA também é isotérmica, sem termociclador.
- E)F – F – V.
Errada, porque a primeira afirmativa não é falsa e a terceira não é verdadeira, então a sequência não fecha.
Gabarito: D
TMA e NASBA são técnicas de amplificação isotérmica, ou seja, acontecem em temperatura constante, sem o ciclo clássico de PCR. Nelas, a ideia é usar a transcriptase reversa para gerar cDNA a partir de RNA e, em seguida, uma RNA polimerase para produzir muitas cópias de RNA. É uma “linha de produção” molecular: entra um alvo, sai uma multidão de cópias, o que ajuda muito na detecção de patógenos e de alvos pouco abundantes. Na primeira afirmativa, o raciocínio está correto: na TMA ocorre amplificação contínua isotérmica, com formação de cDNA pela transcriptase reversa e posterior síntese de RNA pela RNA polimerase. Isso resume bem o mecanismo da técnica. A segunda também é verdadeira. No diagnóstico de Mycobacterium tuberculosis, a TMA pode ser mais sensível que a PCR porque mira rRNA, que costuma existir em muitas cópias por célula, enquanto o DNA-alvo pode estar em menor número. Mais cópias do alvo significam mais chance de detectar a infecção, principalmente quando a carga bacteriana é baixa. A terceira é falsa. A NASBA não depende de termociclador como a PCR, justamente porque também é isotérmica e ocorre em temperatura fixa. Então a banca quis testar o contraste: TMA e NASBA são técnicas parecidas nesse ponto, e não exigem desnaturação, anelamento e extensão em temperaturas diferentes. Por isso, o gabarito é D, com sequência V - V - F.