Os métodos moleculares para o diagnóstico de doenças infecciosas trouxeram grandes avanços às análises laboratoriais. Dentre as várias técnicas descritas na literatura, destaca-se a reação em cadeia da polimerase (PCR) como uma das mais proeminentes. Considerando os princípios e etapas da PCR, analise as afirmativas a seguir. I. Dois iniciadores oligonucleotídeos que flanqueiam o DNA-alvo são adicionados em excesso ao DNA-molde que é desnaturado termicamente. II. O íon magnésio é essencial, pois atua como cofator para a ação da enzima DNA-polimerase. III. A etapa de desnaturação do DNA ocorre em temperaturas inferiores às da etapa de anelamento dos iniciadores oligonucleotídeos. A sequência está correta em
- A)I, II e III.
Essa alternativa reúne as três afirmativas como se todas estivessem corretas. As afirmativas I e II realmente descrevem princípios da PCR, mas a III erra ao inverter as temperaturas: a desnaturação ocorre em temperatura mais alta, e o anelamento dos iniciadores em temperatura mais baixa. Como a sequência depende da veracidade de cada item, a inclusão da III compromete a alternativa.
- B)I, apenas.
Aqui se afirma apenas a proposição I, isto é, que há dois iniciadores oligonucleotídeos em excesso flanqueando o DNA-alvo após a desnaturação do molde, o que está correto. O problema é que a II também é verdadeira, porque o Mg2+ é indispensável como cofator da DNA-polimerase na PCR; portanto, não se pode limitar a resposta à I.
- C)I e II, apenas.
Esta é a combinação adequada porque contempla as afirmativas I e II, que estão corretas, e exclui a III, que está errada. Na PCR, os primers flanqueiam a região-alvo e orientam a síntese, e o magnésio é essencial para a atividade catalítica da DNA-polimerase. Já a desnaturação não ocorre em temperatura inferior à de anelamento, mas justamente em temperatura superior, o que invalida a III.
- D)I e III, apenas.
A alternativa reúne I e III, dizendo que a PCR envolve primers flanqueando o alvo e que a desnaturação ocorre em temperatura inferior à do anelamento. Embora a I esteja certa, a III está conceitualmente invertida: a desnaturação exige calor mais alto para separar as fitas de DNA, enquanto o anelamento acontece em temperatura menor para permitir a ligação dos primers. Além disso, essa opção deixa de fora a II, que também é verdadeira por causa da necessidade de Mg2+ como cofator.
- E)II e III, apenas.
Aqui se sustenta que apenas II e III compõem a resposta. A II é correta ao reconhecer o papel do Mg2+ na atividade da DNA-polimerase, mas a III está errada porque troca a ordem das etapas térmicas da PCR, e a I também é verdadeira ao descrever os primers em excesso flanqueando o DNA-alvo. Assim, a alternativa exclui uma afirmativa correta e inclui uma incorreta.
Gabarito: C
A PCR, ou reação em cadeia da polimerase, é uma técnica usada para copiar um trecho específico de DNA milhões de vezes, o que ajuda muito no diagnóstico de infecções e em outras análises moleculares. Para isso, a reação precisa de um DNA-molde, dois iniciadores (primers) que se ligam nas extremidades da região alvo, uma DNA-polimerase termoestável, nucleotídeos e íons magnésio. É quase uma linha de montagem: cada etapa prepara o terreno para a próxima. Na primeira afirmativa, o enunciado está correto: os primers flanqueiam o DNA-alvo e são adicionados em excesso para permitir sua ligação ao molde após a desnaturação térmica. Na segunda, também está correta: o Mg2+ é cofator indispensável para a atividade da DNA-polimerase, influenciando diretamente a eficiência da amplificação. Sem magnésio adequado, a reação simplesmente não rende bem. A terceira afirmativa está errada porque a desnaturação ocorre em temperatura mais alta do que o anelamento dos primers. Em geral, a desnaturação fica em torno de 94-95 °C, enquanto o anelamento acontece em temperatura menor, ajustada à composição dos iniciadores. Portanto, a sequência correta é I e II, apenas, que corresponde à alternativa C.