Em relação à aplicação da citometria de fluxo no diagnóstico hematológico, analise as afirmativas a seguir. I. A técnica de imunofluorescência permite diferenciar linfócitos CD4 e CD8 e sua contagem absoluta pode ser realizada por citometria de fluxo. II – No método indireto de imunofluorescência, o antígeno de interesse é identificado por um anticorpo direcionado para este antígeno, marcado a um fluoróforo. III – Os citômetros de fluxo permitem a diferenciação de células por sua morfologia, utilizando parâmetros como tamanho e granulosidade. Está correto o que se afirma em
- A)I, somente.
A alternativa sustenta que apenas a afirmativa I está correta. De fato, é possível diferenciar linfócitos CD4 e CD8 por anticorpos fluorescentes, e a citometria de fluxo também permite estimar a contagem absoluta dessas subpopulações. O problema é que a afirmativa III também está correta, porque o equipamento separa células por tamanho e granulosidade; por isso, você não pode limitar a resposta só à I.
- B)II, somente.
A alternativa aposta na afirmativa II, que descreve o antígeno de interesse sendo reconhecido por um anticorpo já marcado com fluoróforo. Esse enunciado, porém, corresponde à imunofluorescência direta, não à indireta: no método indireto, o anticorpo primário é não marcado e a detecção ocorre por um anticorpo secundário fluorescente. Como o conceito foi invertido, a alternativa não se sustenta.
- C)I e II, somente.
Aqui se afirma que apenas I e II estariam corretas. A afirmativa I procede, porque a imunofluorescência e a citometria de fluxo permitem identificar CD4 e CD8 e quantificar essas células; já a II erra ao atribuir ao método indireto um anticorpo primário fluorescente. Além disso, a III também é verdadeira, pois a citometria usa parâmetros como dispersão frontal e lateral para distinguir células, então essa combinação não fecha.
- D)I e III, somente.
Esta é a combinação adequada porque reúne I e III, que são verdadeiras. A I está correta ao dizer que a imunofluorescência permite diferenciar linfócitos CD4 e CD8 e que a contagem absoluta pode ser feita por citometria de fluxo; a III também está correta, pois o equipamento diferencia células por tamanho e granulosidade, usando sinais de scatter. A II é a única incorreta, já que descreve como indireta uma técnica que, na verdade, é a direta.
- E)I, II e III.
A alternativa afirma que as três proposições estariam corretas. Isso não se confirma porque a II confunde os métodos: na imunofluorescência indireta, o anticorpo primário não é marcado e a fluorescência vem de um secundário; o que a frase descreve é a imunofluorescência direta. Embora I e III estejam corretas, a presença de uma afirmativa falsa impede aceitar o conjunto integral.
Gabarito: D
A citometria de fluxo é uma técnica muito usada na hematologia porque consegue analisar células rapidamente, uma a uma, em suspensão. Ela ajuda a identificar populações celulares por marcadores de superfície e também por características físicas, como tamanho e complexidade interna. Em outras palavras: ela não olha só a “etiqueta” da célula, mas também o “jeito” dela. Na afirmativa I, a ideia está correta. Marcadores como CD4 e CD8 podem ser detectados por anticorpos fluorescentes, e a citometria de fluxo permite não só separar essas subpopulações de linfócitos, mas também fazer a contagem absoluta delas. Isso é muito útil, por exemplo, na avaliação imunológica e em doenças hematológicas. A afirmativa II é o ponto que costuma confundir. No método indireto de imunofluorescência, primeiro o antígeno é ligado por um anticorpo primário não marcado; depois, um segundo anticorpo, marcado com fluoróforo, se liga ao primeiro. Se o anticorpo já estiver marcado diretamente, aí você está falando de imunofluorescência direta, não indireta. A afirmativa III também está correta, porque os citômetros usam parâmetros físicos como FSC e SSC para estimar tamanho e granulosidade celular. Então, como I e III estão certas e II está errada, o gabarito é a letra D. Esse tipo de questão adora trocar o nome da técnica para ver se você escorrega no detalhe.